Uso de las pipetas electrónicas Thermo Scientific Finnpipette Novus para un pipeteo preciso y eficiente.

LHC Research Group, Thermo Fisher Scientific, Vantaa, Finland

Introducción

La correcta medición de la concentración de distintos analitos requiere un correcto uso de las micropipetas. La medición de volúmenes de reactivos y muestras es crítica durante la fase preanalítica de un proceso de medición, por lo tanto, la selección de la micropipeta se vuelve un paso crucial.

Las Micropipetas Electrónicas Novus, con 10 funciones diferentes, pueden ayudarnos a optimizar las mediciones de micro volúmenes.

Se presenta a continuación un estudio de una micropipeta modelo Finnpipette Novus con el modelo Finnpipette manual, para determinar si existían diferencias apreciables en la velocidad de pipeteo y en la precisión durante la preparación de una curva.

Materiales y Métodos

1.- Micropipetas Electrónicas Thermo Scientific Finnpipette Novus (30-300 µl, 0.5-5 ml)

2.- Micropipeta manual Finnpipette (0.5-5 ml)

3.- Puntas Thermo Scientific Finntip (300 µl, 5 ml)

4.- Tubos de Ensayo

5.- Microplacas de Microtitulación Negras de 96 pocillos

6.- Suero Fetal Bovino (Sigma-Aldrich)

7.- Suero Salino Fosfato Dulbecco

8.- Reactivo o-Phtaldeído Fluoraldeído OPA, 0026025

9.- Lector de Microplacas Multimodo

La prueba comienza utilizando una Pipeta Electrónica Novus de 5 mL y una micropipeta manual Finnpipette de 5 mL.  Se preparan diluciones de Suero Fetal Bovino desde 12,5 hasta 100 µg/ml con ambas pipetas.

La prueba con la pipeta electrónica Novus fue realizada de dos formas:  Primero se realizó la curva, utilizando la función estándar “Forward”, y luego se realizó una curva utilizando la función “Dilution & Mix”, con la velocidad de la micropipeta establecida en “nivel 9” tanto para la aspiración como para la dispensación.

El modo “Dilution & Mix” permite que los volúmenes de dos líquidos sean dispensados y mezclados.  Después de tomar una cantidad de buffer de dilución, una cantidad de aire es tomada, justo antes de la aspiración de la muestra.  Entonces el botón de disparo se mantiene presionado, de tal forma que la pipeta comienza a “mezclar” (rápidamente aspira y dispensa) el 70% del volumen seleccionado.

 

 

 

 

 

 

 

El tiempo que tardó en preparar cada dilución fue grabado.  La concentración de proteínas fue determinada gracias a OPA-solution, que permite la rápida cuantificación de proteínas de péptidos en solución. Esta solución reacciona con los aminoácidos primarios, resultando en derivados del isoindol altamente fluorescentes.

(Fig 1) Tiempo Requerido para preparar una serie de diluciones con una pipeta manual y una pipeta Electrónica Novus, usando diferentes modos.

100 µL de cada dilución de Suero Fetal Bovino fueron pipeteadas como tres réplicas dentro microplacas negras Microtiter®; luego se adhirieron 100 µl de OPA solution.  Las microplacas se centrifugaron a 2,000 rpm por 2 min. La fluorescencia fue medida utilizando un lector de microplacas multimodo.  Las pruebas se repitieron en 3 días distintos para corroborar la repetibilidad.

Curvas lineares fueron utilizadas para conectar los puntos de medición, luego se calculó el valor de R2.  El valor R2 es una medición de la exactitud de la regresión linear; “1” representa un encaje perfecto entre los datos obtenidos y la línea que los conecta; mientras que “0” representa ninguna relación estadística entre los datos y la línea.

Resultados

Las curvas de calibración de Suero Fetal Bovino se muestran en las gráficas de más abajo.

(Fig 2) Curva de Calibración de BSA, utilizando la micropipeta electrónica Finnpipette Novus, en el modo “Dilute & Mix”.

(Fig 3) Curva de Calibración de BSA, utilizando una micropipeta Finnpipette manual.

 

Ambas curvas obtuvieron un valor de R2 > 0.99, indicando una muy buena relación entre los resultados obtenidos y la linealidad de la curva.  Las curvas preparadas con las micropipetas electrónicas fueron un poco más convergentes, como se puede apreciar (Fig 2 y Fig 3).  El tiempo que requirió preparar las diluciones fue entre 4.5 y 6.5 min.  Las micropipetas electrónicas Novus resultaron entre un 20 y un 30% más rápidas que las pipetas manuales (Fig 1); una ventaja muy importante, cuando trabajamos con analitos muy sensibles o propensos a la oxidación.  El modo “Dilute & Mix” permitió que la preparación de las curvas fuese un poco más rápido, logrando un flujo de trabajo mucho más rápido.  La necesidad de mezclar las muestras en un vórtex fue eliminada, lo cual reduce el riesgo de lesiones por estrés repetitivo.

 

Conclusiones

La micropipeta electrónica Finnpipette Novus demostró ser una versátil y excelente herramienta para preparar curvas de calibración.  La micropipeta, además demostró su capacidad para desarrollar curvas más precisas, en un 20 – 30% menos de tiempo que con una pipeta manual.  La precisión de la curva se debió, en parte a la operación del dedo índice en la pipeta electrónica, que ayuda en mantener un óptimo posicionamiento; y al movimiento de su pistón motorizado, que asegura la velocidad constante de pipeteo.

En GrupoBios estamos preocupados de la optimización de sus tiempos en el laboratorio; contamos con la mayor parte de los modelos Finnpipette disponibles para entrega inmediata, proveyendo asistencia y servicio técnico para todos nuestros modelos.

1.- www.thermoscientific.com /finnpipette

2.- Application Note: ANHPNovussc10-0020

Infórmese de nuestras últimas noticias y ofertas especiales

GrupoBios 2019.